什么是流式天博体育app仪？
在流式天博体育app仪中，天博体育app或其他生物粒子中被迫以单文件和高速流过的相互作用区域流动，它们与一个或多个聚焦的激光束相交。每个天博体育app都会记录所得的激光激光荧光强度，并且通常记录散射的激光强度。在计算仪器时，这允许大量天博体育app群快速分析，例如，查看特定类型或类型的天博体育app的百分比。在配置为也支持排序的仪器中，通过使用电场将其偏转到插座中，分别收集了目标类型的单元格，再次基于每个单元的荧光/散射签名。
流式细胞术快速，使其适用于许多不同的应用程序。它被广泛用于血细胞分析，例如全血细胞计数或“ CBC”。它也用于天博体育app实验室和药物发现中，通常用于分析血细胞以外的其他类型的哺乳动物细胞。它有时被用来天博体育app海水中的微小生物和为畜牧业的性精子，例如，有利于在奶牛中产生女性后代的生产。
使用更多波长和紫外线波长
即使它已经存在了几十年，流式天博体育app仪还是一个动态的领域。一个很大的趋势称为“多参数流式天博体育app仪”，其中多达12个不同的激光波长用于分析大量不同参数的天博体育app。激光制造商通过以新的波长提供了以通用格式的新波长以及通过在Turnkey Light Engine中包装多个激光器来支持这一趋势。 （这OBIS产品线来自Cooherent体现了这两个发展。）
另一个趋势是紫外线（UV）激光波长的使用增加。这允许扩展多参数概念，并且还可以使用自动荧光。这是指在不使用荧光染料或其他添加剂的情况下自然荧光的天博体育app中发现的材料。这些材料包括一些重要的代谢物，NAD（P）H和FAD。
天博体育app人员使用时间来弄清楚事情
在以前的中连贯的成功故事，我们描述了杰西卡·休斯顿（Jessica Houston）（新墨西哥州立大学）的天博体育app小组是如何开发和使用时间分辨流式细胞仪的先驱。我们讨论了为什么它们针对NAD（P）手动时尚。这使他们不仅可以计数细胞，还可以确定其代谢状况。休斯顿博士解释说：“大多数流式细胞术测量是基于荧光信号的强度。但是，有许多因素可以引入噪声和错误，包括荧光色体的表面或内部构成多少与细胞的表面或内部结合。我们决定在每个单元格中均与静物的衰减时间依赖于动物。 （内源性的）自动荧光的材料。
它们对NAD（P）H和FAD特别感兴趣，因为这些辅助因子的荧光寿命表明它们是否与蛋白质结合。反过来，这表明天博体育app如何氧化糖以获取能量，主要是通过称为氧化磷酸化和糖酵解的过程。在许多癌天博体育app中以及其他“故障”或陷入困境的天博体育app中，报告显示了高水平的“自由”，未结合的NAD（P）H，这表明天博体育app正在通过称为糖酵解的效率较低的过程来产生能量。相对于NAD（P）H的FAD的量的比率是光学测量的，表明天博体育app中的代谢活性，称为氧化还原比。
CW Lasers的巧妙技巧
首先，休斯顿组使用天博体育app束的脉冲来获取时间依赖于时间的数据。然后，该仪器以两种方式之一记录了荧光脉冲的衰变。随着天博体育app激发的关闭，当实时衰减曲线被关闭，或者在频域中随着天博体育app在非常高速的情况下反复调节。后一种方法是该组如何在375 nm的波长下使用OBIS天博体育app器来监测FAD。但是，要准确地确定完整的氧化还原比，理想情况下需要测量FAD和NAD（p）h。并且要独立测量NAD（P）H荧光衰减时间需要在紫外线中进一步激发 - 在349 nm左右。
NFLIC方法的关键概念。当天博体育app穿过不均匀的束轮廓时，荧光会上升并下降。与激发曲线相比，相位延迟是荧光寿命的直接度量。图形由休斯顿实验室提供。
最近，Coohrent提供了休斯顿的小组，开发了一个新的OBIS型号，该模型开发了349 nm。但是，这对375 nm激光器使用了不同的内部技术，并且直接调节并不那么简单。这对他们来说没问题，因为几年前，该小组开发了一种称为非调节荧光寿命天博体育app术（NFLIC）的聪明技术，该技术使用连续波（CW）激光来确定平均荧光寿命。
图1显示了其工作原理。通过使用具有完美TEM00输出光束的激光器，当单元通过焦点转移时，激发概率上升并落在高斯梁曲线上。但是非零荧光衰减时间会导致所谓的荧光脉冲延迟（FPD）。当天博体育app通过梁时，荧光强度比高斯激发曲线更慢。休斯顿团队严格证明FPD是电池平均荧光寿命的有效表示。
新的OBIS 375在休斯顿实验室的NFLIC天博体育app非常有效，因为它具有出色的输出束质量。休斯顿教授解释说：“首先，它具有我们需要的漂亮干净的TEM00梁形状。这也是一个非常低的激光。同样重要的是，功率，梁的形状和光束指向非常稳定。这很重要。这很重要，因为它可以强大的使用荧光脉冲 - 脉冲脉冲和荧光寿命之间使用特殊荧光的荧光度的荧光量的关系。
癌天博体育app抗性
癌细胞是一个强大的敌人，因为它们通常会产生对其他强大的化学疗法药物的抗性。在休斯顿实验室的一名天博体育app生萨曼莎·瓦伦蒂诺（Samantha Valentino）在Cyto 2023会议（加拿大蒙特利尔）上进行了出色的演示，展示了使用时间分辨的流式细胞术的价值来确定FAD/NADH荧光寿命和氧化还原比例作为强大的工具，以监测对乳腺癌的耐乳腺癌药物，称为化学疗法药物，称为Tamoxifen。。
MCF和T47D乳腺癌天博体育app的荧光寿命数据 - 敏感和抗性天博体育app系之间的比较。图形提供休斯顿实验室。
具体而言，她解释说，他莫昔芬是一种广泛使用的药物，可有效抵抗乳腺癌，其特征为“雌激素受体阳性”。它用于实现缓解。但是，阻力通常在开始治疗后的2至5年内发展。 Valentino首先指出，氧化还原比在更具侵略性的癌细胞（例如耐药性癌症）中通常会更偏转。她天博体育app育app育app了两种不同的乳腺癌类型（MCF-7和T47D）。在这两种情况下，她都比较了他莫昔芬敏感的癌细胞系与他莫昔芬耐药的细胞系。图2总结了结果，表明他们的方法揭示了敏感和抗性细胞类型的统计学意义差异。不用说，快速分析癌细胞群体的药物耐药性的能力可能是抗癌武器库中的重要新工具：在药物发现和天博体育app育app育app中，并提供改进的患者特异性治疗。
摘要
基于激光激发荧光的天博体育app技术流式天博体育app仪， DNA测序，和微观组织活检越来越重要，支持了个性化医学趋势，这是最近的Covid-19-19次大流行进一步加速的。连贯的强烈致力于通过天博体育app工具来支持这些技术的进步，以提高其速度和数据质量，降低使用障碍并降低整体仪器成本。
