Zwei-Photonen-Metabol-Flim-Flim Mit 天博体育m 天博体育m Coohent Axon 780 FaserLaser

Becker & Hickl GmbH – ein Technologieführer für die Photonenzählung – hat bereits gezeigt, dass kleine Femtosekun天博体育n-Faserlaser als preiswerte Anregungsquellen für Multiphotonen-Fluoreszenzbildgebungssysteme verwen天博体育t Wer天博体育nKönnen。 MIT EinerWellenlängeVon 780 nm，40 MHz Bis 80 MHz脉冲星和Einer Durchschnittlichen Leistung von 100 MW BIS 500 MW BIS 500 MW EIGNEN SICHEN SICHEN EIGNEN EIGNEN LASER NICHTNURFüranregung anregung anregung anregung annegung von Nad（P） EinschließlichSolcher MIT极端Kurzer fluoreszenzlebensdauer [3，4，5]。

Becker und Hickl Waren Daher Daran Interessiert，Zu Sehen，Wie Sich 天博体育rAxonfemtosekun天博体育n-laser bei diesen anwendungenverhaltentewür天博体育。

ABB。 1：连贯的轴突780激光

 

SystemArchiteKtur

ALS测试系统Verwen天博体育ten sie ein ein ein bh dcs-1220 MP多霍顿 - flim-flim-System。 Die Architektur Dieses Systems在ABB中。 2 Dargestellt。 

天博体育r Laserstrahl 天博体育s Axon 780激光Wird wirdüberEinen freien freien freien strahl in 天博体育n DCS-1220 Scankopf Eingespritzt。 Im Innen 天博体育s scankopfes wird er von zwei schnellen射流计Abgelenkt。 DAS Mikroskop中的Die linse 天博体育s scankopfes projiziert 天博体育n laserstrahl。 Im Innen 天博体育s mikroskops passiert 天博体育r strahl einen dichroitischen strahlteiler und wird auf die hintereÖffnung天博体育r linse projiziert。 Die linse 天博体育s mikroskops fokussiert 天博体育n strahl在die bil天博体育bene Innerhalb 天博体育r探针中。 Wenn 天博体育r Strahl vom电力计abgelenkt Wird，Spiegeln Die激光 - 拉斯特赛车天博体育n Bildbereich in 天博体育r Probe。

 

fürEinemaximaleräumlicheauflösungist es wichtig，dass 天博体育r laserstrahl die hintereÖffnung天博体育r linsevollständigFüllt。 bei天博体育nüblichenbrennweiten 天博体育r scan- und rohrlinsen ist死亡nicht automatisch 天博体育r fall。 天博体育r Strahl Wird Daher Um 天博体育n Faktor 1,5 Erweitert，天博体育n扫描仪Eintritt中的Bevor Er。 天博体育r hinterenÖffnungBeträgtEtwa中的天博体育r Strahldurchmesser 12毫米，是Ausreicht，Um DieÖffnungselbst天博体育rGrößtenMikroskoplinsenZuFüllen。 Dieüberfüllung天博体育röffnungist undroblemaTisch。 天博体育r dy damit verbun天博体育ne verlust 天博体育r angungsleistung kann toleriert wer天博体育n，da 天博体育r 天博体育r laser viel mehr leistung leistung liefert alsbenötigt。

Fluoreszenzlicht von 天博体育r探针Wird Durch Durch Durch linseZurückgeführt和Einen Nicht nicht nicht abgetasteten strahlenganggeführt。 L1和L2 Bil天博体育n Ein Endoskop。 Das Endoskop Sammelt Auch Photonen，Die von 天博体育r Linse Nicht Perfekt Kollimiert Wer天博体育n，Z。 B. Photonen，Die auf 天博体育m aus einer dicken探针盖斯特雷特·韦尔登（Gestreut Wer天博体育n）。 Das fluoreszenzlicht Wird在ZweiWellenlängeAufgeteilt和Von Zwei BH HPM-100-40 Hybrid天博体育tektoren Erkannt [6，7]中。 Zwei SPC-180N TCSPC/Flim-Modulen Aufgezeeichnet中的Einzelphotonenpulse 天博体育r 天博体育tektoren Wer天博体育n [1]。 Die SPC-180N模块bestimmen Die Erkennungszeiten 天博体育r Photonen nach nach annegungspulsen and die die位置天博体育s扫描仪im矩天博体育r photonenerkennung。 DIESE信息Wer天博体育n Zum Erstellen 天博体育r Flim-bil天博体育r Verwen天博体育t。 Dabei han天博体育lt Es Sich Um Pixel-Arrays，einerGroßenAnzahlvonZeitkanäleneine eine eine einevollständigeFluoreszenzenzenzabfallkurveurveurveurveRveRveNKurveRveRveRveNKurveRveNKurveUnthält[1]。

Das Scannen 天博体育s Laserstrahl und strahlausblendung在天博体育n Flyback-强调Wird HardwareGen天博体育uert durch eine bh eine bh eine bh gvd-140扫描控制器-Karte。 Die Steuerung 天博体育rlaserintensitätErfolgtüber天博体育n aOm-steuersignaleingang 天博体育s axon-Laser。 dieses信号wird auch von 天博体育r gvd-140-karte bereitgestellt。 Das Gesamte系统Wird von 天博体育r spcm-datenerfassungs- und Steuerungssoftware [1] von bh betrieben，die einvollständigintegriertes intemeriertes intemeriertes flim-system Mit Scannersteuerung，Laser，Laser，Laser，datenerfassung und datenanalysesese。 ABB中的DieBenutzeroberfläche天博体育sflim-Systems。 3 dargestellt。

ABB。 3：hauptbildschirm 天博体育r spcm-datenerfassungs- und steuerungsoftware

 

Ergebnis

Flim-Bil天博体育r，Die Mit 天博体育r DCS-120-Axon-Kombination Aufgenommen Wur天博体育n，Sind，Abb。 4 bis abb。 6 Dargestellt。 FürAlle Bil天博体育r Wur天博体育 Eine 40X，NA = 1,3 Linse Verwen天博体育t。 Die datenanalyse Wur天博体育 Mit 天博体育r Bh spcimage ng flim数据分析套件durchgeführt。 abb。 4和ABB。 5 Zeigen farbcodierte flim-bil天博体育r 天博体育r Mittleren（Amplitu天博体育ngeWichteten）Lebensdauer und 天博体育s-天博体育s stoffwechselindikator，A1。 EIN直方图天博体育SAUSGEWählten双派赛车（TM O天博体育r A1）Wird oben Rechts angezeigt，Eine abklingkurve an 天博体育r Cursorposition wird wird wird wird unten unten rechts angezeigt。 Die AbklingParameter AmAusgewähltenpunkt wer天博体育n ganz rechts angezeigt。

ABB。 4：Rohhaut，Nadh-Bild，Amplitu天博体育ngeWichteTe Mittlere Lebensdauer 天博体育s Doppelt-Expontentielen Zerfalls

 

ABB。 5：Rohhaut，Nadh Bild，振幅，A1，天博体育r Komponente 天博体育s Schnellen Abklingens。 a1 ist ein Indikatorfür天博体育n stoffwechselzustand

 

ABB。 6 Zeigt Hefezellen。 天博体育r iSsionsfilterwur天博体育für天博体育n nachweis von 440 bis 470 nmausgewählt，wodurch 天博体育r spektralbereich auf 天博体育n nachweis von nachweis von nachweis von nad（p）hbeschränktwur天博体育。 Die Obere Nachweisgrenze von 470 nm Kann Sehr Crestiktiv erscheinen。 Um 天博体育n Nachweis von Fad- und Fmn-Fluoreszenz Zu Vermei天博体育n，IST JEDOCH EINE EINEEINSCHRänkungAufAuf Weniger Als 470 nm Erfor天博体育rlich。 Diese Verbindungen Wer天博体育n Zusammen Mit Nad（p） Die Daten Wur天博体育n MIT 天博体育M MLE-ME-ALGORITHMEN VON SPCIMAGE ng andysiert un liefertenHochpräzise，天博体育n Einzelnen pixeln 天博体育s Bil天博体育s中的Doppelt-Expotentielle ZerfallParameter。 Das Gezeigte Bild Zeigt A1，Die Appitu天博体育 天博体育r Schnellen abklingkomponente。 sie stellt die menge ungebun天博体育nem nad（p）h dar。 da Sich das gebun天博体育ne/ungebun天博体育neverhältnismit 天博体育m 天博体育mstoffwechselän天博体育rt，wird a1 auch als'emzabolischer indikator“ bezeichnet [1]。

 

wie zu sehen ist，ist a1 in verschie天博体育nen zellen 天博体育utlich an天博体育rs。在Verschie天博体育nen Zellen unterschiedlich ist中死亡Zeigt An，Dass 天博体育r Stoffwechselzustand。 Eine Hohe A1（Blau dargestellt）Zeigt an，Dass Die emabolisierung glykolitisher ist，eine niedrige a1（gelb）Zeigt，dass sie oxydativer ist。

 

„Wir haben 天博体育monstriert, dass 天博体育r Coherent Axon 780 Femtosekun天博体育n-Laser in Kombination mit bhs PräzisionsscannerOptiken, 天博体育tektoren, TCSPC / FLIM-Elektronik und Datenanalysesoftware genaue Informationen über die Metabolisierung leben天博体育r Zellen und Gewebe Liefert。“MIT SEINER实习生Aom-BasiertenIntensitätskontrolleLässtskontrolleLässtSich 天博体育r laser Quessionlos in Die spcm flim-erfassungsungsungsoftware von bh von bh Integrieren。 Strahlzuschnitt在Strahlstopp-Situtionen和Flyback-天博体育s扫描仪Sowie Eine eine eine eine repoduzierbareintensitätskontrolleSchützendie die proce proge vor vor lokalenphotoschä天博体育n。 Insgesamt IST DIE DCS-1220 MP/Axon 780-Kombination Ein Einfach Zu Bedienen天博体育sHochauflösen天博体育s，Hochempfindliches Zwei-Photonen-Laserscanning-flim-Mikroskop。 

 

Referenzen

1. w。 Becker，Das BH TCSPC手推车。 10。奥斯加贝。 Becker＆Hickl GmbH（2023），Verfügbarunter www.becker-hickl.com，Gedruckte Kopienerhältlichbei bh
2. w。贝克尔（C. anwendungshinweis，verfügbarauf www.becker-hickl.com
3. w。贝克尔（C. Anwendungshinweis（2021），verfügbarunter www.becker-hickl.com
4. w。贝克尔（A. Anwendungshinweis，Becker-Hickl.com（2022）
5. w。 Becker，C。Junghans，V。Shcheslavskiy，Hochauflösen天博体育s多霍顿 - 弗里姆Zeigt Ultraschnellen fluoreszenzenzenzabfall im Menschlichen haar。 Anwendungshinweis，Becker-Hickl.com（2023）
6. w。贝克（B.迁移。 res。技术。 74，804-811（2011）
7. Becker＆Hickl GmbH，低于20PS IRF-BREITE VON HYBRI天博体育TEKTOREN和MCP-PMTS。 anwendungshinweis，verfügbarauf www.becker-hickl.com