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高安定を夸るfuェムト秒天博综合app官网登录により、生体膜と界面活性剤の2D IR分光法研究での高データ出力を実现

概要

karurosu・baイズ教授の天博综合app官网登录室(テキサス大学オースティン校)の间歇たちは、亲水性/疎水性界面のダイナミクスを天博综合app官网登录し、生体膜と工业用界面活性剤の両方の详细な机能を解明しています。彼らは、Astrellaウルtorafァーsutoreza天博综合app官网登录をベーsuに构成した2次元赤外分光装置を幅広く活用しています。出力の安定性と容易な操作性を组み合わせて、公表に値するデータによる天博综合app官网登录室のsuruープットの高さを実现しています。

天博综合app官网登录 IR分光法における高いデータ出力性能

现実の膜と工业用界面活性剤

バイズ教授は天博综合app官网登录の动机について、「界面活性剤と废水膜についての従」来の天博综合app官网登录は、単一の种类の基底または界面活性剤が关与する単纯なモデルシテムを対象にしてきました。こうした天博综合app官网登录も重要情报を提供してきましたが、得られた知见は必ずしも现実のシsutemuを反应しているとは限りません。たとえば、生体膜には何百または何千もの异なる基准が含まれています。现在、生物学は原本是高效化するがあることが认识されているため、この予想外の化学的多様性は、间违いなく重要なに役立っています。私たちの天博综合app官网登录では、细胞机能を制御する特定のタンパク质の折り畳みにおける膜の不均一性の役割を调查しています」と同教授は语り、同様の化学的多様性が、石油回收や润滑などの用途に使用される工业用界面活性剤の分野でも见られる、と付け加えています。界面活性剤が石油化学由来のものであれ、パーム油などの生物由来のものであれ、その分子は锁长、功能基、分岐などの点で多くの违いがあるのが特徴です。

 

「2D分光法の原理はよく知られていますが、実装するのは大抵非常に复雑になります。」

 

2D IR分光法のユuniークな力

2D IR分光法は、バイズ教授のグループが天博综合app官网登录で使用する强力なツールの1つです。 2D分光法の原理はよく知られていますが、実装するのは大抵非常に复雑になります。従来の(1次元)赤外线吸收测定では、吸收量は単一のパラメータである赤外线周波数の关数として测定され、通常はFTIR(furーriエ変换)分光计を使用します。各吸收ピークは、别々の振动分子に対応します。 2D IRでは、ポンプおよびプローブと呼ばれる2つの赤外线源の结果として、吸收が效果的に测定されます。次に、データは通常、2つの周波数の2D等高线図としてプロットされます。ここでの対角线プロットは単なる线形supekutoruです。図1に示すように、これらのデータプロットでは、信号强度を表すために疑似カラーが使用されます。 [1]

なぜでしょうか。この非常に复雑な実験的プローチによって、他の手段では简単に得ることができない何かが得られるのでしょうか。非対角のピークがあるというこ结合とは、これら2つの振动がしている、つまり、1つ以上の原子を共有しているか、ある种の化学反应で密接に接続されていることを示しています。たとえば、ピークの形状から均一および不均一な広がり成分が明らかになり、これにより分子とその周辺の环境との应答に关系する动的情报が得られます。また、解析とモデrinグにより、データセットからその他のより微细な情报も抽出することができます。 

データは周波数领域でプロトされていますが、図1に模式的に示すように、现在ほとんどの2D分光法はウルトラafァーsu toreーザパルスを使用して时间领域で実行されます。试料は、対象となるすべての周波数を含む2つの広帯域fuェムto秒ポンプパルスによって励起されます。その后、2つのポンプパルスの间の遅延が缲り返しスキャンされ、その结果得られるプローブパルスへの影响が周波数领域にfururiエ変换されます。 (これは、FT-NMRの実行方法と概念的に似ています)。プローブパルスは、対象となるすべての周波数を含む広帯域fェムto秒パrusuでもあります。试料通过后、プローブパルスはモノクロメーターに分散され、プローブ周波数轴が直接取得されます。 supekutorucharezaparusuo使用して记录されるため、ポンプとプローブ间の遅延を制御して、これらすべての效果の时间的な挙动(可干渉时间など)を示すこともできます。

图 1

图1:2D IR分光法では、広帯域の中赤外线ポンプパルスのペアによって试料に振动コヒーrensuが引き起こされます。わずかな遅延の后、第3広帯域パルスが印加され、测定された3次信号が生成されます。図はバイズ教授の天博综合app官网登录室のご厚意による掲载。

复数の机能を备えた坚牢な実験shisutemu

バイズ教授は次のように述べています。「2D IRは、堰膜の水素结合のダイナミクスを调べるための优れた手法であることが十分に证明されています。 亲水性 /疎水性の违いによって界面が定义され、界面ではバルクと比较して水素结合のダイナミクスが大きく乱されます」。バイズ教授は、2D IRのもう1つの利点はカルボniル(C=O)伸缩振动から得られる比较强的信号いである、と付け加えます。一般的な斋の大部分は、水との水素结合に重要な役割を果たすカルボニル基を持っているため、さまざまな不均一な系にある碱を対象とする教授的天博综合app官网登录と非常によくマッチします。 [2-3]

2D IR装置のoreーザ光源は、调整可能な光パラメトrikku天博综合app官网登录(NDFGを备えたCoherent TOPAS Prime)と组み合わせた连贯的 Astrellaです。Astrellaは、中心波长が800 nm付近で100 fsのパルsuを発生するユuniークなwanwanbokkusu天博综合app官网登录です。 OPA/NDFG构成により、中赤外全域でチューniningu可能なパルsuが生成されます。バイズ教授の构成では通常、基准やタンパク质のカルボニル伸缩振动にマッチするように、1750~1580 cm-1の周波数に相当する5.7~6.2ミクロンの中心波长に调整されます。 100 fsのパルパルは、同じ测定中に碱幅のエステルカルボNIルとタンパク质のアミドカルボNIルをプローブするのに十分なsupekutorunの范囲を提供します。

 

「2D IRは、高原膜の水素结合のダイナミクスを调べるための优れた手法であることが十分に证明されています。」

 

同时空间分割能力および时间分割能力による温度计测

図2はバイズ教授の天博综合app官网登录室で使用されている2D IR装置の主な要素を模式的に示したものです。ウルtorafァーsuto2D IR実験の少年には、特注の机器を使用して个别のパルスを生成していました。各パルsuは异なるビム経路で生成されたため、干渉计の品质に适合するようにすべてのビームを试料上に重ねるには、配置の点で大きな问题がありました。现在、バイズ教授のような骨折たちは、市贩のパルス整形器(PhaseTech Spectroscopy) Inc.のQuickshape)を使用して间隔の分割い励起パルスを生成しています。さらに、すべてのパルスを単一の同一线上のビーム経路で生成して、実験を大幅に简素化しています。

连贯的Astrella信号遅延ジェネreーター(SDG Elite)の高度な电子パrusu遅延机能は、过渡2D IR分光法などのより高度な実験に役立ちます。このモードでは、追加のUVreーザを使用して化学反応を光torigaし、2D IRを介して迹追します。 [4]従来の「ポンププローブ」方式と同様、この実装は「UVポンプ2D IRプローブ」と考えることができます。図2に示すように、SDG Eliteの复数の出力は光学装置のさまざまなコンポーネントを相当于するために使用されます。

 

天博综合app官网登录 IRsettoakpuno 主な要素

图2:2D IR装置の主な要素を示す模式図。相干Astrellashisutemuは、Vitaraオシreータ、Revolutionponpureーザ、メインのチタンサァイアーザで构成されています。信号遅延発生器は、装置を类似させるための电子タイミングパルスの生成に使用されます。図はバイズ教授の天博综合app官网登录室のご厚意による掲载。

 

reーザの安定性により时间のデータ取得が可能

Astrellaは、CoherentのHALT/HASSpuロトコルにより设计および制造されており、比类なireーザの安定性と信頼性を実现しています。 HALTは高度加速寿命测试(加速寿命试験)の略で、HASSは高度加速应力筛选(加速sutoresu性能试験)の略です。バイズ教授は自分の天博综合app官网登录を可能にした重要な要因として、Astrellaの优れた安定性を挙げています。

バイズ教授のグループで行われる2D IR実験の多くは、1试料あたり16〜24时间のデータ取得时间を必要とし、この间、reーザ出力のあらゆるが常に完全に安定していなければならないためです。データ取得时间が长くなるのは、信号强度が小さいためです。教授は次のように说明しています。「IR迁移の発振强度は电子迁移よりもはるかにい低のが一般的であるため、2D IR信号は弱くなります。さらに、私たちは同位体置换法を采用しています。不均一混合物中の1つの电解质种をターゲットとするため、その基准を炭素13で标志して、C=Osutorechchiをより低い周波数にshifutoさせます。そのため、ターゲットとする全体の5%であれば、信号强度はさらに下がります。时间に依存する天博综合app官网登录を行おうとすると実験はさらに长くなります」。

バイズ教授、运用の简素化により天博综合app官网登录室へのパンデミックの影响を最小限に减低

2D IR装置は、バイズ教授の天博综合app官网登录室で复数の学生や博士天博综合app官网登录员が共同するorisosuとして使われているため、星辰の长期的な信頼性とシンプルな操作性は、出力の安定性と同じほど重要な要素となります。バイズ教授は、次のように说明しています。「学生は、通常2周间の时间ブロックで独占して机器を使用できるよう割り当てられます。このケジューringグが円滑かつ公平に行われるためには、信頼性の高いオンデマンド性能が必要になります。私たちはAstrellaでそれを実现しています。実际、24时间365日reーザを稼働させたままにして、実质的に忘れてしまうほどにするのが最适なソryyーションであると分かっています。また、サービsu契约も充実していて、reーザに问题が発生するというまれなケーがあっても、ほぼすぐに复旧できます」。バイズ教授は、Astrellaの简単な操作性により(「本当にただの光源です」と言っています)、学生たちがreーザに注意を払うことなく実験に用力を注げるようになったと述べています。これは2020年のコロナウイルス感染症によるパンデミック制の际、研究室の生产性の点で特に重要になりました。同教授は次のように言っています。「大学侧の规制により、私たちの研究室では1度に1人しか作业できませんでした。そのため、ウルトラァーァーァーザ天博综合app官网登录の使用経験がほとんどない学部学生は、直接の支持や监督なしで作业をしなければなりませんでした。しかし、この人员规制は、今のところ私たちの研究室の生产を全く落としていません。2020年だけで10篇の论文が提出されました」。

 

これらの2D IR 天博综合app官网登录から得られたユuniークな情报

2D IR分光法によって明らかにされたエキサイティングな新しい科学的知见の一例が、迪亚膜に埋め込まれたタンパク质を详细にシミュureートした図3に示されています。従来の意见では、一般に水は疎水性の内部から排除されるとされてきました。しかし、同位体标志された2D IR実験でのデータは、膜コア内に容器な水の浸透があることを示しています。このナップショットは、このデータに基づいて行われた、膜内の両亲媒性ペプチドの分子动力学(MD)シミュreーションによるものです。疎水性(ashiru锁)领域の深さが1 nm以下でも、水分子は主锁と水素结合する可能性があることに注意してください。视覚的に分かりやすくするため、ここでは周囲の寺を半透明のsuティックとして示し、ペプチドを囲む水分子のみを示しています。栅の平均的なヘッドグループの位置は破线で示しています。

「大学侧の规制により、私たちの研究室では一次に作业できるのは一人だけでした。そのため、ウルトラァーァーァーザ天博综合app官网登录の使用経験がほとんどない学部学生は、直接の支援や监督なしで作业をしなければなりませんでした」

天博综合app官网登录 IR分光法が解き明かす新しい科学

图3:疎水性膜环境への水の浸透。
図はBaiz教授の天博综合app官网登录室のご厚意による掲载。

概要

2D IR分光法は、単结合reberuでの化学现象を调べる强力な技术です。特にターンキーウルtorafァーsutoreza天博综合app官网登录における技术的な刚性性とshisutemu信頼性が向上したため、天博综合app官网登录室ではこの技术をFTIRなどの确立されたルーチン方式と同じakuse性と信頼性を备えたオンデマンド分析手法として活用できるようになりました。

参考文献

[1] Flanagan、Jennifer C.、Mason L. Valentine 和 Carlos R. Baiz。 “脂水界面的超快动力学。”化学天博综合app官网登录报告 53.9 (2020): 1860-1868.
[2] Flanagan、Jennifer C.、Alfredo E. Cardenas 和 Carlos R. Baiz。 “脂-水界面的超快光谱:跨膜拥挤驱动氢键动力学。”物理化学快报杂志 11.10 (2020): 4093-4098.
[3] 弗拉纳根、詹妮弗·C. 和卡洛斯·R. 拜兹。 “位点特异性肽探针检测脂质膜中埋藏的水。”生物物理学杂志116.9(2019):1692-1700。
[4] Flanagan、Jennifer C. 和 Carlos R. Baiz。

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