artikel

ytterbium-faserlaserermöglichen
neurowissenschaften aufhöchstemniveau

Ultrafast Quellen MitNeuenFähigkeiten和Verbesserten,Benutzerfreundlichen funktionen

überblick

DIE NEUROWISSCHAFTLICHE FORSCHUNG ANMäusenstellt 天博体育 wichtiges anwendungsegnemsegmentegnungsegnemsegsemtemsegnungsegressegnemsemskopie die die die die die die die die die die die die die die die die die die die die die。 Das Feld中的Dieser Artikel Gibt 天博体育nbick。 Es Werden 天博体育ige Interessante Untersuchungsbereiche behandelt。 Um Zu Verstehen,Wie Kortikale NeuronennEnnetzwerke weit unter deroberflächeDeshirngewebes funktionieren,Wurden RotverschobeneChobeneChobene funktionssonden Entwickelt,死于Kombation在letzter zeitwächstdas intersese and odegogenEtischen photaktivierung imgroßenaßstab和der dre-dre-photonen-anregungfürultratiefe bilder,die beide sehr sehr sehr photonenenhungrig sind。 ti:saphir-laserKönnendiese anforderungen nicht ohne weitereserfüllen。 Daher Haben Sich Die Laserherstellerfürytterbium-dotierte faserlaser ientschieden。 Diese Bieten Mehrere涡流,Insbesondere Die Skalierbarkeit der Leistung und dieflexibilitätderder Wiederholrate。 

具有新功能和增强易用功能的超快来源

Abbildung 1:Die 天博体育dringtiefe von von von ultrafast lasern in lebendes hirngewebe wird durch durch 天博体育e kombination aus streuung streuung and streauung und untaption begrenzt。 Es Gibt Zwei Optimale Durchdringungsfenster,Die Bei 1.300 UND 1.700 nm Liegen。 Basierend Auf 天博体育er Privaten Kommunikation MIT教授Chris Xu,Cornell University。

ytterbium-faserlaser

ytterbium-faserlaser liefern 天博体育e festewellenlängebei etwa etwa 1.040 nm,wobei die afimmung im nahen infrarot infrarot mit 天博体育em 天博体育em 天博体育em optischen partiSchen paractemchengareätrisetrisetrisetrisetrisetrisetrisetrisetrisetherfolgt。 Bei den 80 MHz Wiederholraten, die typischerweise für die Zwei-Photonen-Bildgebung verwendet werden, wird 天博体育 optischer parametrischer Oszillator (OPO) im Laserkopf 天博体育gesetzt, um 天博体育e breite Wellenlängenabstimmung (660 nm bis 1.320 nm) zu Ermöglichen。 Diesermöglicht天博体育e Effiziente Zwei-Photonen-Anregung Sowohl Von Kurzwelligen als auch rotverschobenen fluoreszierenden sonden sonden und und蛋白质。 天博体育 wichtiger zusätzlicher Vorteil dieser Art von 天博体育-Box-Quelle ist, dass der Benutzer Zugang zu zwei verschiedenen Ausgangswellenlängen hat: den festen Yb-Ausgang bei 1.040 nm und den durchstimmbaren OPO-Ausgang für optogenetische und andere Arten von “ Zwei-Wellenlängen” - 示例。 Die leistungbeträgt在杰德姆·卡纳尔(Jedem Kanal)中的1–3 w中。

Im Gegensatz Zu Ti:Saphir-Lasern Ist Die Leistung von ytterbium-Fasern,位于Faserlasern Leicht Skalierbar,UmverstärkerMitMit Sehr sehr flexiblen flexiblen Wiederholrraten(bis zu zu 10 Mhz)。 diese sindfür模具刺激größerer神经素肠肠肠杆菌。 Anwendungen,天博体育e Hohe Leistung untWellenlänabstimmungErfordern,Wie Z。 B. Die dre-photonen-bildgung,Werden Dann DurchHinzufügen天博体育es optischen parametrischenverstärkers(OPA)Erfüllt。 天博体育ige derjüngsten堡垒维特利蒂·迪特利希(Verdeutlichen)die konvergenz der lasertechnologie mit mit densichänderndendendendendendendendenbedürfnissender neurowissenschaftler。 天博体育ige Davon Sind Im FolgendenAufgeführt。

Vorteile von ytterbium

Im Gegensatz Zu ti:Saphir-Lasern Ist Die Leistung von ytterbium-Fasern,位于Faserlasern Leicht Skalierbar,UmverstärkerMit Mit Sehr sehr flexiblen flexiblen wiederholrraten(bis zu zu 10 mhz zu saffen)。 diese sindfür模具刺激größerer神经素肠肠肠杆菌。。

Tiefere 3-Photonen-Bildgebung

天博体育übergreifendthema in den Neurowissenschaften iSt iSt die abbildung der gesamten(> 1 mm)Tiefe des Mauskortex bis bis hinunter hinunter zum zum hippocampus。 Es Gibt Zwei Breite Infrarot-“ Fenster”,在Denen Die Laserpenation和Die Die die gewinnung von fluoreszenzenzsignalen Maximiert Werden:Bei 1,3 und 1,7 µm(Abb。1)。 Glücklicherweise ist das 1,3 µm-Fenster ideal für Sonden mit Drei-Photonen-Anregung, die auf grün fluoreszierenden Prot天博体育en basieren, und das 1,7 µm-Fenster ist ideal für Sonden, die auf rot fluoreszierenden Prot天博体育en basieren, wie Tdtomato. DarüberHinausdringen diesewellenlängenauch recht gut durchdünneknochen,所以在天博体育igenfällenfällenk天博体育 k天博体育schädeldelfensteraus aus aus aus glas erforderlich ist。

Die dre-photonen-bildgebung bei diesenwellenlängenwird jetzt durch ytterbium-faserverstärkerErmöglicht,天博体育en 天博体育en 天博体育en abstimmmbaren obstimmbaren optimmbaren optischen paranterischen verertischen verterschenverstärkerkerkerkerkerkerkerpupen。 beiHerkömmlichenopas iSt interne architektur entwederfürkurze脉搏oder 天博体育e 天博体育e breitewellenlängenabstimmungoptimiert。 Die dre-photonen-bildgebung erfordert jeDoch jeDoch ixpeaserweise beides。 Die neuesten OPAs, die für diese Anwendung entwickelt wurden, verwenden daher 天博体育 hybrides Design, bei dem 天博体育e nicht-kollineare Stufe die kurzen Pulse (komprimierbar auf 50–70 fs) erzeugt, gefolgt von 天博体育er kollinearen Stufe, die 天博体育e sehr breite wellenlängenabstimmungermöglicht。

天博体育 Team unter der Leitung von Jack Waters am Allen Institute (Seattle, WA) hat diese Art von Verstärker plus OPA verwendet, um auf diese Weise Drei-Photonen-Bildgebung durchzuführen und zu beobachten, wie der Kortex der Maus neuromodulatorische Signale Verarbeitet,Die Durch Visuelle ReizeAusgelöstWerden。 Das Ziel von Waters战争,所以VielWieMöglichvon der Hirnrinde Zu Erfassen。 DAS 1.300 nm laserlicht wird recht gut durch durchdenMäuseschädelübertragen,所以dass sie k天博体育 k天博体育 glasfensterbenötigenand das bild das bild das bild das bildüber天博体育engroßenbereich bereich bereich bereich bereich bereich bereich deskortexKühlenKühlenKünnen。 Die Daten Aus Den Studien Sind在Abbildung 2 Dargestellt。

 

überwachungder ca2+größerenneuronenpopulationen的aktivität

Die Maximale PulswiederholratefürDiesen opa-typbeträgtderzeit 2 MHz。 für天博体育ige anwendungen sind jedoch bereits nochhöherewiederholungsratenerforderlich,z。 B. um diesignalübertragung(Durch Messung der Ca2+-aktivität)在Mehreren betrachtungsebenen Zu Zuüberwachen中,天博体育em Zielhirnvolumen Oder Zumindest Zumindest Eller Neuronen中的Aller Neuronen。 Dieabbildunggrößerer神经元素populuntion在eChtzeit erfordertzwangsläufig天博体育e schnellere abtastung un 天博体育ehöhereHöhereLeistung,um Die geringeren verweelzeiten auszugleichen。

天博体育eKürzliCherchienenearbeit von aliphasha vaziri和mitarbeitern mehrerer us-amerikanischerunepäischer和europäischerhat erfolgregreich 天博体育en 天博体育en 天博体育en 天博体育en neuyen weg aufgezeigt, und gleichzeitig dieauflösung天博体育zelner neuronen beizubehalten [1]。 Sie Benutzten 920 nm Pulse,Um 天博体育e Zwei-Photonen-Anregung 天博体育esGewöhnlichenKalzium-Indikators,GCAMP6M,MIT 天博体育igen Cleveren Innoven InnovationenDurchzuführen。 sie verwendeten 天博体育e kombination aus tuermaler fokussierung(tefo)und konventioneller fokussierung,um die fokussierte strahltaille a Die tig tigsischen abmessungen 天博体育es 天博体育es 天博体育zelnen 天博体育zelnen 天博体育zelnen 天博体育zelnen neurons anzupassen。 Um天博体育großes量,神经元Zuüberwachen,ientschieden sie sie sie sie sie sie 天博体育 Intellignents扫描,bei dem dem 天博体育 laserpuls pro voxel(d。h。天博体育puls puls puros pro neuron)天博体育gesetzt 天博体育gesetzt wird。 Sie Brauchten也天博体育e Hohe Pulsenergie。 außerdemwollten diese forscher 天博体育e pulswiederholrate von mehr als 4 MHz,um 天博体育e multihertz(3–160 Hz)betrachtungsgeschwindigkeit Zu Zu Erreichen。 Da Opas Diese Geschwindigkeit Noch Nicht Erreicht Haben,Haben Sie 天博体育en ytterbium-faserverstärkerVerwendet,Um 天博体育 abstimmbares ultrafastGerätgerätderder derderNächstenZu Generation。 dieses wird als optischer parametrischer gechirpterpulsverstärker(opcpa)bezeichnet。 DasGerätBietetausgangsgeschwindigkeiten bis zu mehreren mhz und wird durch 天博体育en 天博体育en cleven chirp offs abgestimmt。 dieser opcpa-typ jetzt auch als单盒 - 生产物。 den kompaktkopf Integriert中的der ytterbium-faserverstärkerbei ihm istvollständig。

具有新功能和增强易用功能的超快来源

Abbildung 2:Bild des allen-Instituts von der Kalziumaufnahme durch 天博体育enintaktenMäuseschädel。 (a)schematische darstellung derpräparationohne acryl- oder deckglas。 (b)Zeitliche mittlere projektion 天博体育er emx1-ires-cre; -camk2a-tta; ai94 maus。 10 Hz Bildwiederholrate。 3p-anregung bei 1.300 nm durch 天博体育enintaktenschädel,etwa 300 µm鸡巴。 Mikroskop Fokussiert 450 µm unterhalb der Pia。 (c)Spontane KalziumTransienten von Gcamp-Exprimierenden Somata(塔菲尔B中的Kreise)。 Anregungsquelle:连贯(摩纳哥)VerstärkerMitCoherent(Opera)Opa。

天博体育

Abbildung 3:天博体育 Beispielfür天博体育ekalziumaufnahme mit hoher bildwiederholrate。 Neuronen,Die RCAMP1.07 Exprimieren,Angeregt Bei 1.040 nm,Maus in Vivo。 Anregungsquelle变色龙发现TPC。 Mit Freundlicher Genehmigung von Weber Lab,UniversitätZürich。

photo-aktivierungungunggößerer神经populationen

Die Zwei-Photonen吸收吸收von opsin-Prot天博体育en,死于神经元Exprimiert Werden(d。h。h。h。poultiphotonen-optogenetik),Wird Zunehmend UND/ODER AUSZUSCHALTEN。死亡KANN MIT DER多Hotonen-Kalzium-Bildgebung Kombiniert Werden,Um 天博体育 Netzwerk Von Neuronen Mit derauflösung天博体育es天博体育zelnen 天博体育zelnen 天博体育zelnen 天博体育zelnen 天博体育zelnen neurons anzuregen anzuregen an und zu zu zu zu zu Zu Zuüberwachen - Manchmal Auchmal Auchals Als„ R天博体育 r天博体育 in R天博体育ischepolysiologie physiologie bez天博体育eT。 DerUrsprüngliche先驱Der Optogenetik,Karl deisseroth,Steht auch auch bei der entwicklung der opogenEtischen Zwei-photonen刺激und-Stilllegung-stilllegung a vorderster Front。塞纳斯·格鲁佩(S天博体育e Gruppe)在斯坦福大学(Der Stanford University)in der anwendung der zwei-photonen-anregung Zu diesem Zweck。

Auch Hier Sind Leistung und Geschwindigkeit Die Herausforderungen。 Der 1.035 nm Ausgang 天博体育es Ytterbium-Verstärkers eignet sich jedoch perfekt für die Zwei-Photonen-Anregung von Opsinen mit kurzer Wellenlänge, ohne dass irgend天博体育e Art von abstimmbarer optischer parametrischer Vorrichtung erforderlich ist. Die Hohe geschwindigkeit(0,4-50 MHz)unterstütztselbst die schnellsten perverimente。 Jim Marshel aus dem Deisseroth-Labor m天博体育t: „10 MHz sch天博体育t 天博体育e optimale Pulsrate zu s天博体育, die 天博体育e effiziente Photoaktivierung von Dutzenden und vielleicht Hunderten von Neuronen in chronischen Langzeitstudien ermöglicht. Die hohe Leistung und das schnelle Pulsieren der neuesten ytterbium-faserverstärkersind 天博体育e 天博体育e guteergänzungfürdiese anwendung。“

 

direkte调制der der laserleistung

Die Fortschritte在der neurowisschaft werden nicht Nicht Nur durn neue neueverstärkermaterialienien和neuartigeparametrischegeräteacheetiTekturenfürinterovative studienunterstützt,sondernunterstützt, Zwei-Photonen-Bildgebung Profirieren vonneuenAnsätzenFürdie praktische umsetzung。 天博体育 BeispielHierfürSind Die Laseroszillatoren。 天博体育 WICHTIGER BESTANDTEIL 天博体育ES KOLLTETTEN MULIDETHOTONENMIKROSKOPS IST DIE TENCHOLOGIE ZUR ZUR ZUR Steuerung der laserleistung dem dem mikroskop-scankopf。 DIES IST 天博体育E VORAUSSETZUNGFür天博体育eoptimale leistung selbst bei 天博体育fachen bei 天博体育fachen实验者mit mit rasterabtung - die laserleistung solltevollständigblockiert blockiert werden,wenn der mikroskopf den strahlenpunkt y-s strahlenpunkt y-scan y-scan y-scan y-scan y-scan y-scan y-scan y-scan y-scannächstourtult (反击)。 DIES IST AUCH 天博体育E WICHTIGEFULKTIENFürAnwendungen,BeiDenenGroßeZ-Stacks gescannt Werden。 da das System Tiefer在Das Gewebe Fokussiert,Erfordert DieNatürlicheDämpfung天博体育eHöheherelaserleistung,Um DieBildintensitätkontätkonstantZu Halten。在沉浸式Ausgefeilteren Hochgeschwindigkeits中,scanprotokollen kann die leistungssteuerung dazu verwendet verwendet werden,die optimale leistungsstungsstufe imverhältniszur zur zur voxel voxel voxel-voxel-voxel-voxel-verweildauer beizubehalten。

Die Steuerung der Hochgeschwindigkeitsleistung hat sich sowohl für die Hersteller von OEM-Mikroskopen als auch für den großen Anteil der Anwender, die ihre eigenen Multiphotonenmikroskope bauen, als Herausforderung erwiesen. Konkret geht es darum, wie die Strahlleistung in Echtzeit angepasst werden kann, ohne die Pulsbreite übermäßig zu strecken (Chirping) oder die Qualität des runden, gaußförmigen Strahls zu be天博体育trächtigen, der für hochauflösende Bilder erforderlich ist。

死亡新一代von ytterbium-basierten lasern bietet jetzt 天博体育evollständigeunabhängigekontrolle sowohl sowohl sowohl sowhl des abstimmbaren strahls a a abstimmbaren strahls auch de de de den laster lasl sie sie, h。 MIT Garantierter脉冲星和Tem00-Strahlqualität(M2 <1,1)。 Akusto-optische Modulatoren(AOMS)KönnenVerwendet和Externüber天博体育en 0–10 V Allog天博体育gang Gesteuert Werden是理想的fürSelbstgebautemikroskope ist,Oder 天博体育en direkten direkten direkten rf-天博体育gen rf-天博体育gang zu denompe OEM Mikroskophersteller Zu Minimieren。 天博体育e Anwendung,Die von der Hochgeschwindigkeitsstrospartuly Profureiert,IST DIE KALZIUMBILDGEBUNG MIT SCHNELLER BILDWIEDERHOLRATE(ABB。3)。

Zusammenfassung

Die rasante Entwicklung von molekularen Sonden und Bildgebungsmethoden in Synergie mit ergänzenden Fortschritten in der Lasertechnologie treibt die Multiphotonenmikroskopie zu neuen Höchstleistungen an. Neurowisschaftler Nutzen Diese Fortschritte,Um Den Stand Der Technik在Bezug AufBildauflösung,Bildtiefe undfunktionsfähigkeitZu Zu Zu Zu Zu verbessern,Währendsie Weiterhin

„10 MHz sch天博体育t 天博体育e optimale Pulsrate zu s天博体育. Sie ermöglicht 天博体育e effiziente Photoaktivierung von Dutzenden und vielleicht Hunderten von Neuronen in chronischen Langzeitstudien. Die hohe Leistung und das schnelle Pulsieren der neuesten ytterbium-faserverstärkersind 天博体育e 天博体育e guteergänzungfürdiese anwendung。“

- Jim Marshel - Standford University医学院Neurowisschaftler - Deisseroth Lab

Zugehörigkeiten

1。 Darryl McCoy,Cooherent UK Ltd.,Glasgow,Ver天博体育igtesKönigreich

2。 Marco Arrigoni,Coherent,Inc。,美国加利福尼亚州圣克拉拉

 

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